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PCR基因扩增仪的设计技术原理

发表时间:2021-06-25  |  点击率:91
  PCR基因扩增仪的设计均按照DNA变性、复性和延伸三个环节以及温度均恒、传导快和升降温迅速等原则,结合传感技术、微电子技术和电子计算机等技术发展而成的自动化和智能化的仪器设备。
  PCR技术的原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。
  PCR基因扩增仪是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。
  PCR基因扩增仪技术原理
  该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3?-OH末端,并以此为起始点,沿模板5?→3?方向延伸,合成一条新的DNA互补链。
  PCR基因扩增仪反应步骤
  分别是1.变性,2.引物退火,3.引物延伸。所谓变性是将DNA加热至90-95℃变性,将双链DNA加热后转为单链DNA做为复制的模板.而引物退火则是引物于一定的温度下(冷却至55-60℃)附着于模板DNA两端。zui后在DNA聚合酶的作用下(加热至70-75℃)进行引物的延伸及另一链的合成。
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