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伯乐电泳槽电场通过凝胶连接两个缓冲腔

发表时间:2021-05-27  |  点击率:110
  根据电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之间的接触可以是直接的液体接触,也可以间接通过凝胶条或滤纸条。管状凝胶电泳和垂直板状电泳大多采取直接液体接触方式。这种方式可以有效地使用电场,但在装置设计上有一些困难,如液体泄漏,电安全和操作麻烦等问题。水平板状电泳槽大多通过间接方式,用滤纸桥搭接。
  以及最近使用缓冲液制作的凝胶条和滤纸条搭接,即半干技术,后种方式使装置简化,操作也大大方便。
  伯乐电泳槽常见问题及解决办法:
  1、伯乐电泳槽纹理和托尾现
  由于样品溶解不佳引起的,克服的方法可以在加样前离心,增加一些增溶辅助试剂如尿素。
  2、蛋白带过宽
  与邻近泳道的蛋白带相连时由于加样量太多,可以减少上样量。
  3、伯乐电泳槽电泳时间比正常要长
  可能由于凝胶缓冲系统和电极缓冲系统的PH选择错误,即缓冲系统的PH和被分离物质的等电点差别太小,或缓冲系统的离子强度太高。
  4、指示剂成微笑符号(指示剂前沿呈现向上的曲线形)
  说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,导致分子有不同的迁移率所致。
  5、指示剂成哭脸符号(指示剂前沿呈现向下的曲线形)
  由于电泳槽的装置不合适,尤其是凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全。
  6、伯乐电泳槽凝胶时间不对
  通常胶在60min,1H内凝,如果凝的太慢,可能是TEMEN,APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用,TEMED不稳定,容易被氧化成黄色。如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。
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